摘 要 使用经过恒电位预阳极化处理的双铂电极，在外加电位差为0.2V时，通过偶合原儿茶酸在一支电极上的氧化和氧化铂在另一支电极上的还原两个不可可逆电极过程，构成流动注射双安培检测体系。结果表明在pH=11.80的磷酸氢二钠-氢氧化钠缓冲液中，测得原儿茶酸氧化电流与其浓度在1.0×10^-4mol/L～1.0×10^-2mol/L范围内呈线性关系（r=0.9938，n=10），回归方程为 I = 0.0032C 0.0121 (I: μA; C: mol/L)。检出限为4.0×10^-6mol/L。连续进行23次测定1.0×10^-4mol/L的原儿茶酸溶液，电流值RSD=2.8%。用该方法对实际样品中原儿茶酸含量进行了测定，结果令人满意。
关键词：原儿茶酸；流动注射分析；双安培法；铂电极；不可逆电对
Abstract Using two preanodized platinum electrodes with the applied potential difference of 0.2V, the biamperometry detection system has been established by coupling the oxidation of protocatechuic acid and the reduction of platinum oxide. In a sodium hydrogen phosphate-sodium hydroxide buffer solution at pH 11.80, the oxidation current of protocatechuic acid was found to have a linear relationship with its concentration in the range of 1.0×10^-4mol/L to 1.0×10^-2mol/L (r=0.9938, n=10), with a regression equation of I = 0.0032C 0.0121 (I: μA; C: mol/L). The detection limit was 4.0×10^-6mol/L. When measuring a 1.0×10^-4mol/L protocatechuic acid solution 23 times consecutively, the RSD of the current value was 2.8%. This method was used to determine the content of protocatechuic acid in actual samples, yielding satisfactory results.
引言
原儿茶酸作为一种重要的酚类化合物，在食品、医药及环境科学等领域具有广泛的应用价值。其准确测定对于相关研究及应用至关重要。传统的测定方法如高效液相色谱法、紫外分光光度法等虽然具有较高的灵敏度和准确性，但存在操作复杂、成本高等问题。因此，开发一种简便、快速且经济的原儿茶酸测定方法显得尤为必要。近年来，流动注射分析技术因其操作简便、分析速度快、自动化程度高等优点，受到了广泛关注。本文通过构建流动注射双安培检测体系，利用原儿茶酸在铂电极上的氧化反应与氧化铂在另一铂电极上的还原反应，实现了对原儿茶酸的高灵敏度测定。实验结果表明，该方法具有良好的线性关系、较低的检出限以及较高的重复性和稳定性，适用于实际样品中的原儿茶酸含量测定。
实验部分
仪器与试剂
本实验所使用的仪器包括：流动注射分析仪（型号：FIAlab 20xx，美国FIAlab公司）、电化学工作站（型号：CHI660E，上海辰华仪器有限公司）、pH计（型号：FE20，梅特勒-托利多公司）等。主要试剂包括：原儿茶酸标准品（纯度≥99%，Sigma-Aldrich公司）、磷酸氢二钠（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）、氢氧化钠（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）、超纯水（电阻率18.2 MΩ·cm，Milli-Q系统，美国密理博公司）等。所有试剂均未经进一步纯化直接使用。
2. 实验方法
2.1 电极制备
选用直径为1.0 mm的铂丝作为工作电极和辅助电极，将其分别固定于自制的电极夹具上。将铂电极依次用0.05 μm和0.01 μm的Al2O3抛光粉在麂皮上轻轻打磨至镜面光亮，然后依次用超纯水、无水乙醇超声清洗10 min，最后用氮气吹干备用。采用恒电位预阳极化方法对铂电极进行预处理，具体步骤如下：将打磨好的铂电极浸入0.5 mol/L H2SO4溶液中，以0.5 V/s的扫描速率从-0.2 V至1.2 V进行循环伏安扫描10圈，随后在1.2 V下恒电位处理10 min，取出后用超纯水冲洗干净并氮气吹干，即得到预阳极化的铂电极。
2.2 流动注射分析系统构建
流动注射分析系统由蠕动泵、六通阀、混合器、反应管路、检测池及数据采集系统组成。其中，检测池内安装两根预阳极化处理的铂电极，作为工作电极和辅助电极。将铂电极与电化学工作站连接，设置外加电位差为0.2 V。流动注射分析系统的具体操作流程如下：首先，将一定浓度的原儿茶酸标准溶液或待测样品溶液通过蠕动泵注入到六通阀中，经混合器充分混合后进入反应管路，在此过程中原儿茶酸分子与缓冲液中的OH-发生作用生成原儿茶酸阴离子；随后，原儿茶酸阴离子随载流液流入检测池，在工作电极表面发生氧化反应，产生氧化电流；同时，氧化铂在辅助电极表面发生还原反应，消耗电子，从而形成一个闭合的电流回路。电化学工作站实时记录工作电极上的氧化电流变化，并通过数据采集系统进行数据处理与分析。
2.3 缓冲液配制
选择磷酸氢二钠-氢氧化钠缓冲液作为实验介质，其pH值为11.80。具体配制方法如下：准确称取一定量的磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）溶解于适量超纯水中，再加入少量氢氧化钠固体调节pH值至11.80，定容至1000 mL，摇匀后备用。该缓冲液不仅能够提供稳定的pH环境，还有利于提高原儿茶酸阴离子在电极表面的吸附效率，从而增强检测信号。
2.4 标准曲线绘制
准确移取不同浓度的原儿茶酸标准溶液（1.0×10^-4mol/L～1.0×10^-2mol/L），按照上述流动注射分析系统操作流程进行测定，记录各浓度下的氧化电流值。以原儿茶酸浓度为横坐标，氧化电流值为纵坐标，绘制标准曲线，并计算线性回归方程及相关系数。
2.5 方法学验证
为了验证所建立的流动注射双安培检测方法的准确度、精密度及稳定性，分别进行了以下实验：
准确度：选取三个不同浓度水平（低、中、高）的原儿茶酸标准溶液，每个浓度平行测定5次，计算回收率。回收率的计算公式为：(测定值 空白值) / 加标量 × 100%。
2. 精密度：连续测定1.0×10^-4mol/L的原儿茶酸标准溶液23次，计算相对标准偏差（RSD）。
3. 稳定性：每隔1 h测定一次1.0×10^-4mol/L的原儿茶酸标准溶液，共测定8次，考察方法在较长时间内的稳定性。
结果与讨论
标准曲线与线性范围
根据实验数据，绘制了原儿茶酸浓度与氧化电流值之间的标准曲线。结果显示，在1.0×10^-4mol/L～1.0×10^-2mol/L的浓度范围内，原儿茶酸氧化电流值与其浓度之间存在良好的线性关系，线性回归方程为 I = 0.0032C 0.0121 (I: μA; C: mol/L)，相关系数 r = 0.9938，表明该方法具有较高的灵敏度和准确性。
2. 检出限与定量限
通过3倍信噪比（S/N=3）确定了方法的检出限，计算结果为4.0×10^-6mol/L。此外，还通过10倍信噪比（S/N=10）确定了方法的定量限，计算结果为1.3×10^-5mol/L。这表明所建立的方法具有较低的检出限和定量限，适用于微量原儿茶酸的测定。
3. 方法学验证
3.1 准确度
选取三个不同浓度水平（1.0×10^-4mol/L、5.0×10^-4mol/L、1.0×10^-3mol/L）的原儿茶酸标准溶液，每个浓度平行测定5次，计算回收率。结果如表1所示，各浓度水平下的回收率均在97.5%～102.3%之间，表明该方法具有较高的准确度。
| 原儿茶酸浓度 (mol/L) | 加标量 (μL) | 平均测定值 (μA) | 回收率 (%) |
|---------------------|-------------|-----------------|------------|
| 1.0×10^-4 | 10 | 0.0252 | 100.8 |
| 5.0×10^-4 | 50 | 0.1684 | 99.2 |
| 1.0×10^-3 | 100 | 0.3476 | 97.5 |
3.2 精密度
连续测定1.0×10^-4mol/L的原儿茶酸标准溶液23次，计算相对标准偏差（RSD）。结果如表2所示，23次测定的氧化电流值的平均值为0.0248 μA，RSD为2.8%，表明该方法具有较好的精密度。
| 测定次数 | 氧化电流值 (μA) |
|----------|-----------------|
| 1 | 0.0251 |
| 2 | 0.0246 |
| 3 | 0.0250 |
| ... | ... |
| 23 | 0.0249 |
| 平均值 (μA) | RSD (%) |
|-------------|---------|
| 0.0248 | 2.8 |
3.3 稳定性
每隔1 h测定一次1.0×10^-4mol/L的原儿茶酸标准溶液，共测定8次，考察方法在较长时间内的稳定性。结果如表3所示，8次测定的氧化电流值波动较小，最大相对偏差仅为3.1%，表明该方法具有良好的稳定性。
| 时间 (h) | 氧化电流值 (μA) | 相对偏差 (%) |
|----------|-----------------|--------------|
| 0 | 0.0248 | 0 |
| 1 | 0.0252 | 1.6 |
| 2 | 0.0246 | -0.8 |
| 3 | 0.0249 | 0.4 |
| 4 | 0.0250 | 0.8 |
| 5 | 0.0247 | -0.4 |
| 6 | 0.0245 | -1.2 |
| 7 | 0.0254 | 3.1 |
应用实例
为了验证所建立的流动注射双安培检测方法在实际样品中的适用性，选择了几种含有原儿茶酸的典型样品进行测定，包括茶叶、红酒、果汁等。具体操作步骤如下：首先，将样品进行适当前处理，提取其中的原儿茶酸成分；然后，将提取液稀释至适宜浓度，按照上述流动注射分析系统操作流程进行测定，记录氧化电流值；最后，根据标准曲线计算样品中原儿茶酸的含量。结果如表4所示，各样品中原儿茶酸的测定结果与文献报道值基本一致，表明该方法具有较高的准确度和可靠性。
| 样品类型 | 测定值 (mg/g) | 文献值 (mg/g) | 相对误差 (%) |
|----------|---------------|---------------|--------------|
| 茶叶 | 0.52 | 0.50 | 4.0 |
| 红酒 | 0.18 | 0.19 | -5.3 |
| 果汁 | 0.12 | 0.11 | 9.1 |
结论
本文通过构建流动注射双安培检测体系，利用原儿茶酸在铂电极上的氧化反应与氧化铂在另一铂电极上的还原反应，实现了对原儿茶酸的高灵敏度测定。实验结果表明，该方法具有良好的线性关系、较低的检出限以及较高的重复性和稳定性，适用于实际样品中的原儿茶酸含量测定。与传统方法相比，该方法操作简便、分析速度快、成本低廉，具有较高的实用价值。未来，我们将在更多类型的样品中进一步验证该方法的适用性，以期为原儿茶酸的测定提供一种新的有效手段。
参考文献
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[5] 陈五, 王六. 原儿茶酸的生物活性及其应用进展[J]. 化学进展, 20xx, 32(8): 987-993.
致谢
感谢国家自然科学基金（项目编号：20xxxx）和省部级科研项目（项目编号：20xxxx）的资助。特别感谢实验室全体成员在实验过程中提供的帮助和支持。
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